５２

Ａ嚣ＶＡＮ细ＣＥＳ石ＩＮ忘ＮＥ赫ＯＣＨ进ＥＭＩＣ展ＡＬＳ

ＡＤ

ｎＰ圈限

籼槲ｌ期

蛋白质提取及分离纯化研究进展

吕

微蒋剑春徐俊明

（中国林业科学研究院林产化工研究所生物质化学利用国家工程实验室，南京２１００４２）

摘要蛋白质的分离纯化是蛋白质研究领域的关键技术之一。介绍了从动植物原料中提取蛋白质的方法。综述了各类不同的分离提纯技术。其中重点介绍了高效液相色谱法。指出了蛋白质分离纯化面临的问题及其解决方法。

关键词蛋白质提取分离纯化高效液相色谱法

随着生物技术的迅速发展，科学工作者运用

基因工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术已经

来说，碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取，而酸性蛋白质用偏碱性的提取液。提取温度视有效成分的性质而定，一般采用低温（４℃以下）操作。由于蛋白质是具有特定等电点的两性电解质，一般在偏离蛋白质等电点Ｏ．５ｐＨ单位以上时，蛋白质的溶解度增加。

刘香萍等Ｈ３研究了不同种类酸在不同ｐＨ值下对紫花苜蓿叶蛋白的提取效果，发现ｐＨ值为３

可以设计生产多种蛋白质，而蛋白质分离纯化技

术却没有得到相应的发展，这阻碍了蛋白质工业化的迅速发展，也无法实现其经济和社会效益ｕ】。蛋白质作为一种长链高分子化合物，相对分子质量大，在溶液中的扩散系数小、黏度大、易变性，因而在提取及分离纯化过程中存在一定的技术瓶颈，表现为：（１）大多数蛋白质产品是生物

时，苜蓿叶蛋白质的提取产量最高，醋酸较盐酸提

取效果好。郑亚军等¨’利用磷酸盐缓冲溶液在最佳工艺参数条件下从椰子肉中提取椰子蛋白，提取率为７６．６０％。１．２有机溶液提取法

活性物质，在分离纯化过程中，有机溶剂、溶液ｐＨ

值、离子强度的变化均可使蛋白质变性失活；（２）蛋白质产品在物料中含量很低，且物料组成非常复杂；（３）含蛋白质产品的物料不稳定，蛋白质产品易受料液中蛋白水解酶降解；（３）很多蛋白质

一些与脂质结合比较牢固或分子中非极性侧

链较多的蛋白质不溶于水、稀盐溶液、稀酸或稀碱中，可用乙醇、丙酮和丁醇等有机溶剂提取。

Ｌｅｅ等哺’将栀子果实粉碎，在黑暗的地下室用９９％乙醇浸渍数月，然后用滤纸过滤乙醇浸提物，经浓缩、冷冻干燥，并经硅胶柱层析，再经冻干、盐析、透析等步骤获得其中的糖蛋白。１．３酶法

与传统的碱法提取蛋白质相比，酶法提取具有时间短、反应条件温和、且不会产生有害物质等优点。

产品作为医药、食品被人类利用，因而要求蛋白质产品必须是高度纯化的，产品无菌、无致热源等【２】。因此，蛋白质的分离与纯化已成为当前生

物工程的关键技术问题。

根据蛋白质提取及分离纯化的特点，本文综

述了蛋白质提取方法和分离纯化技术，其中重点介绍分离纯化技术中的高效液相色谱法。ｌ蛋白质提取方法

由于组成蛋白质的氨基酸种类繁多，使得各种不同的蛋白质表现出不同的理化性质。因此，蛋白质的提取方法需要根据其特性，选用适宜的溶剂与提取方法。目前文献报道的蛋白质提取方法主要有水溶液提取法、有机溶剂提取法、酶法、

王川等哺１分别用胰酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶对猪皮进行胶原蛋白的提取，胰酶得率最高，可

超声波萃取法、双水相萃取法和反胶团萃取法等。

１．１水溶液提取法

稀盐和缓冲体系的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大，是提取蛋白质最常用的溶剂。一般

收稿日期：２０１０一∞一２５。

作者简介：吕微。在读硕士研究生，从事生物质能源转化利用的研究。

基金项目：国家林业局公益性行业专项经费资助

计划（２００９０４００８，ＣＡＦＹＢＢ２００８０２８）；国家８６３

（２００９ＡＡ０５２４３７）；国家自然基金（３０７００６３４）；江苏省基金

（ＢＫ２００９５４５）。

万方数据