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沉淀法分离纯化蛋白质综述

沉淀法分离纯化蛋白质综述 摘要：蛋白质分离纯化是用生物工程下游技术从混合物之当中分离纯化出所需要得目的蛋白质的方法， 是当代生物产业当中的核心技术。分离纯化蛋白质的方法有沉淀法、电泳法、透析法、层析法及高速离心法。根据蛋白质的溶解性质，利用沉淀法对其分离纯化方式进行综述。

关键词：蛋白质 沉淀法 盐析法 有机溶剂沉淀法 等电点沉淀法

蛋白质是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命。蛋白质具有巨大的商业价值，广泛应用于医药、食品、食品添加剂、纺织、制革、工业催化剂等领域。从生物材料中分离制备蛋白质，研究其结构与功能，对于了解生命活动的规律，阐明生命现象的本质有重大意义。而蛋白质分离纯化是当代生物产业当中的核心技术，该技术难度、成本均高。根据蛋白质的酸碱性质、分子大小与形状、溶解性质及其与配体亲和性等性质可对蛋白质进行分离纯化。沉淀法也称溶解度法。其纯化生命大分子物质的基本原理是根据各种物质的结构差异性来改变溶液的某些性质，进而导致有效成分的溶解度发生变化。沉淀是溶液中的溶质由液相变成固相的过程。在生物工业、有机化工偶那个专业、无机化工工业及实验室分析中是分离与纯化最常用的方法之一。常用的蛋白质沉淀法有盐析法、有机溶剂沉淀法及等电点沉淀法，实际工作中常联合使用这三种沉淀法以达到较高的蛋白质分离提纯的效果。

1. 盐析法

蛋白质在高盐浓度下发生盐溶，这是因为当向蛋白质溶液中加入中性盐到一定浓度时，蛋白质表面电荷被大量中和，即亲水基团被大量中性盐离子所包围，水分子离开蛋白质的周围，暴露出疏水区域，疏水区域间的相互作用使蛋白质分子相互聚集而沉淀。盐析的一般操作步骤是，选择一定浓度范围的盐溶液（如0-25%饱和度的硫酸铵）使部分杂质呈“盐析”状态从溶液中沉淀出来，经离心去除。而目的的蛋白质呈盐溶状态，而从溶液中分离出来。盐析的影响因素包括蛋白质浓度、溶液pH值及温度。当蛋白质浓度较低时，发生盐析需要较高的离子浓度；当pH值为蛋白质的等电点时，蛋白质分子上的净电荷数为零，溶解度最小；较高的温度有利于盐析沉淀，但较高温度易使蛋白质变性和发生共沉作用。

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