细菌介绍

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大肠菌群测定操作规程

适用范围：大肠菌群系指一群在 36℃条件下培养 48h 能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革 兰氏阴性无芽孢杆菌。通常用此法作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量。

二. 1.

操作内容： 检验程序： 检样→ 稀释 → LST 发酵管(36±1℃,24±2h)

↓→不产气 → 大肠菌群阴性 → 报告 产气 →BGLG(36±1℃,48±2h) → 不产气 → 大肠菌群阴性 → 报告 产气 → 大肠菌群阳性 → 报告 2. 操作方法：

2.1 以无菌操作，将检样 10ml 被测液放于含有 90ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶 内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成 1:10 的均匀稀释液。 2.2 用 1ml 灭菌吸管吸取 1:10 稀释液 1ml,沿管壁徐徐注入含有 9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的 试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液) ,振摇试管，混合均匀，做成 1:100 的稀释液。 (均 液的 PH 值应在 6.5~7.5 之间，必要时分别用 1mol/L 氢氧化钠(NaoH)或(1mol/L)盐酸(HCL) 调节。 2.3 另取 1ml 灭菌吸管，按上条操作顺序，做 10 倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用 1 支 1ml 灭菌吸管。 2.4 根据食品卫生标准要求或对检污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种 3 管。 2.5 初发酵试验：将待检样品接种于月桂基硫盐胰蛋白胨发酵管内，接种量在 1ml,每一稀释度接种 3 管， 36±1℃文箱内培养 24±2h, 置 观察倒管内是否有气泡产生， 如未产气则继续培养至 48h±2h. 记录在 24h 和 48h 内产气的 LST 肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。 2.6 复发酵试验 用按种环从所有 48h±2h 内发酵产气的 LST 肉汤管中分别取培养物 1 环， 移种于 BGLB 肉汤管中， 36±1℃培养 48h±2h,观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 2.8 报告： 根据证实为大肠菌群阳性的管数， MPN 检索表 查 (见 GB/T4789.3 附表 B) 报告每 100ml , (g) 大肠菌群的 MPN 值。