婴幼儿轮状病毒腹泻的研究进展

罗　军

（广西医科大学第一附属医院西院急诊科，广西南宁　５）３０００７

［关键词］轮状病毒腹泻；研究进展　婴幼儿；

［中图分类号］文献标识码］文章编号］（）７２５．７　［００１－５６３９２０１１０３－０２９０－０３　Ｒ　Ａ　［　１ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ

．ｉｓｓｎ．１００１－５６３９．２０１１．０３．０２６　　１９７３年澳大利亚学者ＲＦＢｉｓｈｏｐ在电镜下于急性腹泻患儿十二指肠黏膜活检标本中，发现上皮细胞内存在大量球形病毒颗粒，根据其类似车轮状形态，１９７５年命名为“轮状病毒”（Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ，ＲＶ）。该病毒是引起婴幼儿腹泻的主要病原之一，发病高峰在秋季，故又名“婴幼儿秋季腹泻”。卫生条件的改善也不能降低其发病率，

所以无论在发达国家还是发展中国家，婴幼儿ＲＶ感染都是比较普遍的。但发展中国家的医疗卫生条件明显落后于发达国家，故发展中国家轮状病毒腹泻的死亡率明显高于

发达国家，占８２％左右［１］。本文就引起婴幼儿秋季

腹泻的人类轮状病毒的研究进展综述如下。１　轮状病毒检测方法的研究进展

１１　电镜法　轮状病毒最初是从腹泻患儿小肠上皮细胞经超薄切片在电镜（ＥＭ）下观察发现的。电镜可以直接观察到具有特定形态特征的轮状病毒颗粒，但病毒颗粒易降解，影响检出率，免疫电镜技术（ＩＥＭ）

可以提高电镜对病毒的检出率，它是通过电镜检测特异的凝集反应或利用特异的抗体标记物检测抗原物质，灵敏度和特异度更高。在ＩＥＭ的基础上又发展了固相免疫电镜法（ＳＰＩＥＭ）、修饰性抗体固相免疫电镜法（ＳＰＩＥＭＤＤＡＴ）以及胶体金标记第二抗体固相免疫电镜法（ＳＰＩＥＭＤＤＡＴＧＴ）等方法。有文献认为，用ＳＰＩＥＭＤＤＡＴＧＴ法检测轮状病毒最敏感，是ＥＭ的８００倍，是ＩＥＭ的４５倍，并比较了上述免疫电镜法在人类轮状病毒的应用，认为ＳＰＩＥＭＤＤＡＴ法对检测因背景负染而被其它方法忽略的少量病毒有利，ＳＰＩＥＭＤＤＡＴＧＴ法可用于病毒颗粒已破坏的病毒抗原检测，

而单一特异性抗血清或单克隆抗体的应用，使免疫电镜技术不仅可

检测病毒的存在，还可用于病毒的分型［２］。但因电

镜设备昂贵，操作繁琐，一般实验室开展有一定困难，限制了电镜法在临床检测上的应用。

１２　组织细胞培养法　自从１９８０年Ｗｙａｔｔ等［３］

将人类轮状病毒Ｗａ株在无菌仔猪中连续传代１１

代后转种到非洲弥猴肾细胞中培养获得成功后，推２９０

万方数据

动了人们对人类轮状病毒培养的研究。有文献报道，用非洲绿猴原代肾细胞分离人类轮状病毒较传代细胞分离率高，病毒分离培养准确、可靠，但阳性率较低，需要特殊培养条件，且分离时间也较长，只

有Ａ组ＲＶ可培养［４］

，

故不为临床检测广泛采用。３　电泳法　由于ＲＶ基因组由１１个双链ＲＮＡ片段组成，因此，可用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）检测。ＲＶ的ＲＮＡ在电泳中形成独特的１１条迁移区带图，称电泳型。不同种型的ＲＶ其电泳型不同，Ｖ的ＲＮＡ电泳图型在诊断ＲＶ感染、

确定流行期Ｖ的种类、研究ＲＶ病毒基因组的漂移、基因片段重配等方面的研究具有重要意义。但操作繁琐、费时，有人用琼脂糖凝胶电泳代替ＰＡＧＥ检测ＲＶ的ＮＡ，

操作简单、快速，可用于快速诊断，但不能把１条基因片段分开，

不能分析株间基因组的异同，在条件有限的基层单位可代替ＰＡＧＥ法，

为轮状病毒感染的诊断提供依据［５］

。

４　酶联免疫吸附试验法（ＥＬＩＳＡ）　酶联免疫吸

附试验法是把抗原抗体的免疫反应和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的一种检测技术。１９８５年被ＷＨＯ推荐作为ＨＲＶ的检测手段。ＥＬＩＳＡ操作简便，价格低廉，灵敏度和特异度高，无放射污染，无需特殊仪器，准确性高，其与电镜的符合率为０％，与核酸电泳符合率为１００％。仅２０ｍｉｎ即得

出结果，易于推广和应用［６］

。ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法可根据检测目的的不同设计包被抗体和检测抗体。单克隆抗体技术特异性和灵敏度高，还可进行血清分型、毒株鉴别，适用于大规模临床检测和流行病学调查。

５　乳胶凝集试验（ＬＡＴ）　其原理是应用抗ＲＶ抗体致敏乳胶颗粒作为已知抗体，如果待检粪便标本中含有ＲＶ抗原则发生凝集反应。因具有操作简便、快速、特异性好、敏感性高、抗原稳定、且操作人员无需特殊培训等优点，在我国基层医疗单位广泛

应用，且可达到早期诊断的目的［７］。但如果腹泻标

本中含有较多油脂或其他悬浮物，无法离心干净，形

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