土壤养分及酶活性测试方法

硝态氮的测定:《双波长分光光度法测定土壤硝态氮》,土壤肥料,2006(1):50~52,涂常青,温欣荣。

原理:利用硝酸盐和亚硝酸盐在203nm 和230nm 波长处有较强紫外吸收峰,利用双波长系数倍数法的公式:21kA A A λλ-=?选择合适波长时,从而消除亚硝酸盐、有机质的影响。消除干扰后,硝酸盐氮的含量与A ?呈线性关系,线性范围为0~2.0L /mg ,由此建立了测定土壤硝态氮的新方法。

硝酸盐氮标准比色液:称取0.7220g 与105℃烘箱中烘干2h 干燥冷却后的3KNO 与小烧杯中,加入二次蒸馏水溶解,定量转入1000ml 的容量瓶中,定容、摇匀,即为10ml /ug 的硝酸盐氮标准液。称取该溶液10.00ml 于100ml 容量瓶中,定容、摇匀,即为10ml /ug 的硝酸盐氮标准比色溶液。

亚硝酸盐氮标准比色液:称取0.1232g 2NaNO 于小烧杯中,加入二次蒸馏水,定量转入250ml 容量瓶中,定容、摇匀,即为100ml /ug 亚硝酸盐氮标准溶液。称取该溶液10.00ml 于100ml 容量瓶中,定容、摇匀,即为10ml /ug 亚硝酸盐氮标准比色液。

实验方法:

1、k 系数的确定:

分别准确移取10ml /ug 硝酸盐氮使用液2.00ml 、10ml /ug 亚硝酸盐氮标准使用液2.00ml 、土壤浸提液2.5ml 置于各自的25ml 比色管中,用二次蒸馏水定容、摇匀,用1cm 的石英比色皿,以二次蒸馏水作参比,在UV -紫外可见分光光度计上在190~300nm 范围内扫描,从而确定土壤样品、硝酸盐氮的最大吸收波长203nm ,在230nm 处吸收较弱,而亚硝酸盐氮在210nm 处有最大吸收,在230nm 吸收较弱。选取203nm 、230nm 为测量波长和参比波长测定土壤中硝态氮,从而可消除样品中主要干扰组分亚硝酸盐氮的干扰。据0kA A 230203=-的公式计算,求得72.2k =。

2、标准曲线的绘制:

分别去10ml /ug 硝酸盐氮标准比色液0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50ml

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