小鼠骨髓及脾脏来源的树突状细胞培养及鉴定

目的建立体外培养和扩增树突状细胞(dendritic cell-DC)的方法,为免疫耐受研究提供实验材料和奠定基础。方法在无菌条件下提取ICR小鼠脾脏淋巴细胞和骨髓细胞,以小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL-4)协同诱导下培养,光镜下观察DC的形态,流式细胞仪检测CD80、CD86表达水平。结果骨髓细胞体外诱导培养3天后,光镜下显示细胞表面不规则,呈树突状突起,

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Ch nJLa a n, a c 2 2 Vo 6, . i b Dig M rh, 01, 11 No 3

文章编号:0 7 2 7 2 1 ) 3 0 0— 0 1 0—4 8 ( 0 2 0— 4 8 4

小鼠骨髓及脾脏来源的树突状细胞培养及鉴定 孙国龙王凯忠, 莉付鑫田晓巍。王登莉。赵 慧。,周,,,, (.林大学第一医院胸外科, 1吉吉林长春 1 0 2;.林大学白求恩医学院组织学与胚胎学教研室,林长春 10 2 ) 30 12吉吉 3 0 1摘要:的建立体外培养和扩增树突状细胞 ( e dic e— )方法,免疫耐受研究提供实验材料和奠定基目 dn r i clDC的 t l为础。方法在无菌条件下提取 I R小鼠脾脏淋巴细胞和骨髓细胞,小鼠重组粒细胞一噬细胞集落刺激因子 ( M— C以巨 G

C F和白细胞介素 (L 4协同诱导下培养, S) I- )光镜下观察 D的形态,式细胞仪检测 C 8、 D 6表达水平。结果 C流 D 0C 8骨髓细胞体外诱导培养 3天后,镜下显示细胞表面不规则,树突状突起,光呈可见典型的树突状细胞形态,表达共刺低激分子 ( D 0C 8 ) C 8, D 6。结论与脾脏细胞相比,髓细胞中不仅富含大量的 DC的前体细胞而且诱导成 DC时间短。骨 关键词:突状细胞;髓;脏;树骨脾 中图分类号: 33 R7—文献标识码: A

Cu t r n de iy De r tc Cel ii atd Fr m lu e a d I ntf nd ii lsOrg n e o Bon a r w nd S e n ofM o s SUN o lng, A N G ai e M r o a ple ue Gu—o W K—

zog, h n ZHOU Li e 1 ( . p rme t fto a i u g r Th,t . 1 De a t n h r ccs r ey, eFis i ia s ia f J ln Un v riy, ln, a o rtClnc lHop t lo ii ie st Jii Ch n c u 1 0 2, h n 2 De a t n f Hitlg n a g h n, 3 0 1 C ia; . p rme t soo y a d Emb y lgy, r nBe

tn le eo dia i o r oo No ma h u eColg f Me c lSc— e cs Jii ie st Jii C a gc u, 3 0 1, i a n e, lnUn v riy, ln, h n h n 1 0 2 Chn ) Abta tOhet e To etb ihameh do ut aina d p rf aino e d icc l DCs r m u eb n sr c: jci v sa l to fc li t n u ic to f n rt el s v o i d i s( )fo mo s o e m ar row n p e n i ir nd p o d xp i e a a e ila d e t b ih ba i o h t a d s l e n vt o a r vie e erm nt lm t ra n s a ls ss f r t e s udy ofi m u m nolgia olr o c lt e— a e M e h s Ex r c e heI ne . t od t a td t CR ie s e n[ m p e t sa on a r w e l nd rs e i o iins, d c t r d m c ple y ho y e nd b e m r o c ls u e t rl c nd to e an ulu e

DCsi O i d c d o e o i a tg a u o y e ma r p a e c l n - t n C—n u e fr c mb n n r n l c t— c o h g o o y s i ltn a t r( mu a ig f c o GM— F)a d i t re k n ( L CS n n e lu i 4 I - 4 . e t e c a g so r h l g r b e v d u d r l h c o c p n ) Th n, h h n e f DC mo p oo y we eo s r e n e i tmir s o y a d CD8 CD8 x r s i n l v l we e g 0, 6 e p e so e e s r d t c e wih fo ee td t l w c t y ome r t y.Re u t bo m a r s ls ne row c ls pp a e ir gulr a or e n ii pr e s s a t r e l a e r d r e a nd f m d de drtc oc s e fe 3

d y u t r d wih si u a i g f c o i o wh c h we h y ia r h lg f

e d i c c l, n o t u a o y a s c lu e t t m l t a t ri v t ih s o d t e t p c l n n r mo p o o y o n rt el a d c s i l t r d i s m mo e u e CD8 CD8 ) we e lw x r s i n O h e l l rs f c . n lso Co a e t h p e n c l, o e l c l s( 0。 6 r o e p e so n t e c l a u a e Co cu in u mp r d wi t e s l e e l b n h s m a r w el r ton y rc n DC r c r orc ls bu l o i r o c ls a e no l ih i p e u s e l ta s ndu e nt c d i o DCs w ih a s or i e t h ttm . Ke r s: nd ii l; y wo d De rtcCe l Bon a r; l e e M r ow Sp e n

( i b Di g 2 1 1 0 0 ) Ch nJ La a n, 0 2, 6: 4 8

树突状细胞 ( e d i cC l D是由 S e ma D n r i e— C) t l ti n n

胞分离液购自达科为生物技术有限公司,L4 GM— I一、 CSF、FI TC—a l d l be e Ant— o e iM us CD8 0、PE—a e e lb ld

和 C h l ( 9 3首次分离出来的,是目前所知的 o n1 1 7 ) 它 机体内功能最强的抗原提呈细胞,是唯一能将抗也原提呈给初始 T细胞,发初次免疫应答的抗原提激呈细胞。本研究从小鼠骨髓及脾脏中获取 DC的前

Ani u eC 8 t Mo s D 6购自美国 P P— E ROT C公司。 E H 1 3细胞提取 I R小鼠经脱颈椎处死后立即浸 . C

入体积分数为 7的乙醇中 5 0mi。无菌取出 5一i n 脾以及游离小鼠四肢带有髓腔的骨骼。

体细胞,后在细胞因子的作用下培养出 D并对然 C,其进行鉴定以及比较这两种不同组织来源细胞分化 成 DC的差异。 1材料与方法

脾脏的处理:去除脾脏外表面的脂肪被膜,以预 冷至 4 p .℃ H 7 2的 P S冲洗 2次, 3 r t养 B在 5rl培 l T

皿中放人 4mL E— e T u e淋巴细胞分离液。

Z S pM Mo s 经充分研磨后把悬有脾脏细胞的分离液立即转移到

1 1主要实验仪器三洋 C 养箱、 D Bo c— . O培 B isi

ec n e流式细胞仪、奥林巴斯光学倒置显微镜。 1 2实验动物和试剂 I R小鼠 1 . C 8只,雄性,重体

1 5mL离心管中,盖 2 0u覆 0 l的 1 4 6 0培养基。室 温, 0 8 0 g离心 3 i。细胞层由上到下分 4层, 0r n a 14 6 0覆盖层、巴细胞层、E— e淋 Z S p分离液层、细红

2—2, 0 5g周龄 8 1无菌环境饲养。由吉林大— O w, 学动物实验中心所提供。E— e T u e淋巴细 Z S p M Mo s ●

胞及其他细胞和死细胞碎片。吸出淋巴细胞层,再加入 1 L 6 0培养基,倒洗涤。室温,5 , 0r l 4 o颠 2 0g离心 1 i 0r n收集细胞。倒上清液,无血清培养基 a倾用

基金项目:吉林省科技发展计划项目(0 0 7 5 2 10 4 ) *通讯作者

小鼠骨髓及脾脏来源的树突状细胞培养及鉴定

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