脂质体法和电穿孔法体外转染SD大鼠视网膜M_ller细胞的比较

IntJOphthalmo,lVo.l10,No.2,Feb.2010 Te:l029-82245172

83085628

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Emai:lIJO.2000@http://www.mianfeiwendang.com

#实验论著#

脂质体法和电穿孔法体外转染SD大鼠视网膜M ller细

胞的比较

曾 琦,夏晓波

作者单位:(410008)中国湖南省长沙市,中南大学湘雅医院眼科作者简介:曾琦,女,在读博士研究生,研究方向:青光眼。

通讯作者:夏晓波,教授,博士研究生导师,研究方向:青光眼.xbxia@http://www.mianfeiwendang.com收稿日期:2009-11-19 修回日期:2010-01-08

Thisstudymayprovideanoveltoolforourfuture

targetedgenetherapyonRMCs.#KEYWORDS:lipofection;electroporation;genetransfection;retinalM llercells;enhancedgreenfluorescentproteinZengQ,http://www.mianfeiwendang.comparisonofelectroporationandlipofectionefficiencyinretinalM llercells.IntJOphthalmol(GuojiYankeZazhi)2010;10(2):247-249

Comparisonofelectroporationandlipofec-tionefficiencyinretinalM llercells

QiZeng,Xiao-BoXia

DepartmentofOphthalmology,XiangyaHospita,lCentralSouth

University,Changsha410008,HunanProvince,ChinaCorrespondenceto:Xiao-BoXia.DepartmentofOphthalmology,XiangyaHospita,lCentralSouthUniversity,Changsha410008,HunanProvince,China.xbxia@http://www.mianfeiwendang.comReceived:2009-11-19 Accepted:2010-01-08

Abstract

#AIM:Toevaluatethepossibilityoftransferringenhanced

greenfluorescentprotein(EGFP)toculturedretinalM llercells(RMCs)viaelectroporationandlipofectionandtocomparethetransfectionefficiencyofelectroporationwithlipofectioninculturedRMCsofrats.

#METHODS:Firstofal,lM llercellswereisolatedfromratretina,andproliferatingcellswereexpandedinserum-containingmedium.Secondly,thethirdorfourthpassageofcellswereidentifiedbyglutamatespartatetransporters(GLAST)andglutaminesynthetase(GS).Thirdly,culturedRMCsweretransfectedeitherbyelectroporationorbylipofectionusingaPEGFP-N1plasmid.Atlast,thecellswereanalyzed24,48hours,3,4days,1weekand2weeksaftertransfectionbyfluorescencemicroscopy.

#RESULTS:Ninety-fivepercentculturedRMCswerepositivelyreactedforGLASTandGS.Twenty-fourhoursaftertransfectionthereareonlyfewcellstransfectedinthesetwogroups.However,thepercentageoftrans-fectedcellswassignificantlyhigherwhenelectroporationwasusedascomparedwithlipofectioninforty-eighthoursaftertransfection.Atthistmie,thetransfectionefficiencywassuperiorwithelectroporation(31.0%?218%)ascomparedtolipofection(10.5%?2.4%).Andthereweresignificantdifferencesbetweenthem(P<0101).TheexpressionofEGFPcouldbedetectedforatmost1weekafterlipofectionandmorethan2weeksafterelectroporation.#CONCLUSION:OurresultsshowthefeasibilityofagenetranferintoRMCsviaelectroporationandlipofec-tion.ElectroporationissuperiortolipofectioninRMCs.

摘要

目的:探讨脂质体法及电穿孔法介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染体外培养的视网膜M ller细胞的可行性和区别。

方法:体外培养出生后7~10d的SD大鼠视网膜M ller细胞,免疫荧光染色法鉴定95%以上为视网膜M ller细胞。分别用阳离子脂质体Lipofectamine2000介导的脂质体转染法和电穿孔法将质粒PEGFP-N1转染视网膜M ller细胞,荧光显微镜下检测转染后1,2,3,4d的转染效率,并持续观察至转染后14d,比较两者基因表达持续时间。

结果:荧光显微镜下检测转染后1d,两组均可见少量细胞表达EGFP绿色荧光蛋白。转染后2d,两者转染效率均达到最大,并且电穿孔法介导质粒PEGFP-N1转染M ller细胞效率约为31.0%?2.8%,较脂质体法转染效率(10.5%?2.4%)更高。两者比较有统计学意义(P<0.01)。随后,两者转染效率均逐渐降低。电穿孔转染后的PEGFP-N1可在视网膜M ller细胞内持续表达近14d,而脂质体转染后仅能表达约7d。

结论:脂质体法和电穿孔法均适用于视网膜M ller细胞的基因转染,但电穿孔法效率更高,表达时间更长。关键词:脂转染;电穿孔;基因转染;视网膜M ller细胞;增强型绿色荧光蛋白基因DOI:10.3969/.jissn.1672-5123.2010.02.015

曾琦,夏晓波.脂质体法和电穿孔法体外转染SD大鼠视网膜M ller细胞的比较.国际眼科杂志2010;10(2):247-249

0引言 M ller细胞是人和哺乳动物视网膜中最主要的神经胶质细胞,该细胞从内界膜一直延伸到外界膜,贯穿于整个视网膜,其突起广泛分布于视网膜内各类神经元胞体和纤维之间,与各神经元密切接触,正是这种与视神经元细胞之间的广泛联系使得其在维持视网膜神经元正常功能

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和各种视网膜病理变化中发挥着重要的作用。基因治疗是近年来兴起的一种治疗方法,过去在各种肿瘤和基因缺陷病的研究中应用广泛,而目前以M ller细胞为载体进行的基因治疗也已开始起步。我们用脂质体和电穿孔两种方法分别将真核表达质粒PEGFP-N1转染视网膜M ller细胞,荧光显微镜下检测瞬时转染效率,比较两种方法转

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